การวินิจฉัยโรค ไข้เหลือง นั้นไม่ใช่เรื่องง่ายเนื่องจากภาพทางคลินิกอาจมีอาการที่ยากที่จะแยกแยะจากไข้เลือดออกจากเชื้อไวรัสอื่นมาลาเรียไข้ไทฟอยด์เลปโตสไปโรสิ
ดังนั้นจึงควรมีไข้เหลืองในผู้ป่วยที่อยู่ในพื้นที่ซึ่งมีไข้อย่างเฉียบพลันด้วยหัวใจเต้นช้าและดีซ่าน การทดสอบในห้องปฏิบัติการดำเนินการทันทีในโรงพยาบาลที่ผ่านการรับรองจะอนุญาตให้ยืนยันหรือยกเว้นการวินิจฉัย
การสำรวจที่มีประโยชน์สำหรับจุดประสงค์นี้รวมถึงการนับจำนวนเลือดการตรวจปัสสาวะการทำงานของตับการเพาะเลี้ยงเซลล์และการถอดรหัสย้อนยุคด้วยปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (RT-PCR) การยืนยันการวินิจฉัยนั้นมาจากการมีแอนติบอดีจำเพาะที่ตรวจพบโดยการทดสอบทางเซรุ่มวิทยาเช่น ELISA (การทดสอบอิมมูโนซอร์บลิงค์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์)
