ทดสอบการวัดพลังงานต้านอนุมูลอิสระ

เรียงความ ABTS

นี่เป็นวิธีการวิเคราะห์ที่ใช้การวัดสเปกโทรโฟโตเมตริกเพื่อตรวจสอบความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของตัวอย่าง UV-Vis spectrophotometer ใช้สำหรับวัดค่าการดูดกลืนแสงของสารละลายที่มี ABTS • + อนุมูลอิสระที่เกิดจากการออกซิเดชันของ ABST (2, 2'-azinobis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulphonate) ซึ่งเป็นสารที่ไม่มีสี อนุมูลเป็นสีโดยการดูดซับความยาวคลื่นลักษณะในช่วงที่มองเห็นการเพิ่มโมเลกุลสารต้านอนุมูลอิสระไปยังสารละลาย ABTS • + ซึ่งสามารถกระทำผ่านทั้งไฮโดรเจนและการถ่ายโอนอิเล็กตรอนกำหนดลดอนุมูลอิสระในรูปแบบไม่มีสี ด้วยการเปลี่ยนสีของส่วนผสมปฏิกิริยาการเปลี่ยนสีนี้เป็นสัดส่วนกับปริมาณของสารต้านอนุมูลอิสระในปัจจุบันสามารถวัดได้เป็นการลดลงของการดูดกลืนแสงในช่วงเวลาหนึ่งที่ความยาวคลื่นเฉพาะ (734 นาโนเมตร) พลังงานสารต้านอนุมูลอิสระจะแสดงโดยเปรียบเทียบกับ ค่าการดูดกลืนแสงที่วัดได้สำหรับจำนวนที่ทราบของโมเลกุลสารต้านอนุมูลอิสระที่ได้รับเลือกให้เป็นมาตรฐานอ้างอิงซึ่งโดยปกติจะเป็นวิตามินซีหรือ Trolox (ในกรณีนี้ มีการพูดคุยของกิจกรรมสารต้านอนุมูลอิสระ TEAC Trolox เทียบเท่าสารต้านอนุมูลอิสระความจุ)

การวัดพลังงานต้านอนุมูลอิสระตามการใช้งานของ ABTS นั้นมีข้อดีคือง่ายและรวดเร็ว นอกจากนี้ยังช่วยให้การวัดสารต้านอนุมูลอิสระที่ชอบน้ำและ lipophilic ในช่วงค่า pH ที่กว้าง อย่างไรก็ตามต้องระลึกไว้เสมอว่าอนุมูลอิสระที่ใช้แล้ว (ABTS • +) ไม่ใช่สรีรวิทยาและไม่มีอยู่ในระบบชีวภาพและปัญหาการทำซ้ำของการวัดเนื่องจากจลนศาสตร์ปฏิกิริยาของสารต้านอนุมูลอิสระที่แตกต่างกันนั้นมักถูกเน้น

FRAP (Ferric Reducing Antioxidant Power)

การทดสอบ FRAP เป็นการวัดความสามารถในการลดสารต้านอนุมูลอิสระจากไอออนของเหล็ก มันเป็นวิธีการที่ขึ้นอยู่กับการถ่ายโอนอิเล็กตรอนซึ่งไอออนของเหล็กผ่านจาก Fe3 + ไปที่ Fe2 + ภายใต้เงื่อนไขบางประการของค่า pH (3.6) และการปรากฏตัวของ TPTZ (2, 4, 6-tris (2-pyridyl) -s-triazine) ไอออนเหล่านี้ก่อตัวเป็นสารประกอบเชิงซ้อนที่มีคุณสมบัติแตกต่างกันโดยเฉพาะอนุพันธ์ลด (Fe2 + -TPTZ) ใช้สีฟ้าที่มีค่าการดูดกลืนแสงสูงสุดที่ 593 nm ซึ่งสามารถวัดได้ด้วยสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ ความสามารถในการลดของสารต้านอนุมูลอิสระจึงสามารถวัดได้ในรูปแบบที่แตกต่างกันในการดูดซับของสารละลายที่มีอนุมูลอิสระที่ความยาวคลื่นที่จัดตั้งขึ้นเพื่อเปรียบเทียบกับการเปลี่ยนแปลงที่สัมพันธ์กับมาตรฐาน (เช่นวิตามินซี)

การทดสอบ FRAP ได้รับการออกแบบมาเพื่อวัดกำลังการลดลงของพลาสม่า แต่ถูกดัดแปลงเพื่อทดสอบความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของสารประกอบบริสุทธิ์และเมทริกซ์เชิงซ้อน ในความเป็นจริงเนื่องจากวิธีนี้อนุญาตให้ประเมินความสามารถในการลดเพียงการถ่ายโอนของอิเล็กตรอนโดยไม่สนใจการกระทำของสารต้านอนุมูลอิสระที่ทำหน้าที่ผ่านการถ่ายโอนไฮโดรเจนจึงไม่อนุญาตให้วัดการมีส่วนร่วมของโมเลกุลเช่น thiols และโปรตีน พื้นฐานในของเหลวชีวภาพ (เช่นเลือด) ข้อได้เปรียบในการใช้วิธีนี้คือเป็นหนึ่งในวิธีที่ง่ายที่สุดเร็วที่สุดและมีราคาถูกที่สุดสำหรับการตรวจหาสารต้านอนุมูลอิสระในหลอดทดลอง

ทดสอบ DPPH

2, 2-diphenyl-1-picrilidrazyl (DPPH •) เป็นอนุมูลอิสระไนโตรเจนที่เสถียรและมีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์โดดเด่นด้วยสีแดงม่วง - ม่วงที่รุนแรงซึ่งจะลดสีเมื่อมีการลดลงของโมเลกุลที่มีความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระ โดยการวัดสเปกโทรโฟโตเมทริกซ์ที่ 517 นาโนเมตรของรูปแบบการดูดกลืนแสงของสารละลาย DPPH หลังจากทำปฏิกิริยากับสารประกอบสารต้านอนุมูลอิสระก็เป็นไปได้ที่จะวัดปริมาณกำลังการลดลงของสารทดสอบไม่ว่าจะกระทำโดยการถ่ายโอนไฮโดรเจนหรือการถ่ายโอนอิเล็กตรอน ผลลัพธ์มักแสดงเป็น IC50 นั่นคือปริมาณของสารต้านอนุมูลอิสระที่สามารถลดลง 50% ของความเข้มข้นเริ่มต้นของ DPPH

มันเป็นวิธีที่รวดเร็วง่ายและประหยัด ขีด จำกัด ของเทคนิคการวิเคราะห์นี้ได้รับจากความเป็นไปได้ที่ผลลัพธ์ของการวิเคราะห์จะถูกปลอมแปลงในกรณีที่โมเลกุลของการทดสอบดูดซับในช่วงความยาวคลื่นเดียวกันกับ DPPH หัวรุนแรงหรือการปรากฏตัวของโมเลกุลขนาดใหญ่ที่ขัดขวางโดย sterically พวกมันจะทำปฏิกิริยากับส่วนที่ทำปฏิกิริยาของรูต สิ่งนี้กำหนดว่า DPPH ทำปฏิกิริยากับสารต้านอนุมูลอิสระได้ช้ากว่าอนุมูลเปอร์รอกซิลถึง 1, 000 เท่า

การทดสอบ PCL (Photochemiluminescence)

การทดสอบ PCL ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาของสปีชีส์อนุมูลจำเพาะที่เฉพาะเจาะจงคือ superoxide anion (O2 • -) ที่สร้างโฟโตเมมิคัลโดยรังสียูวีด้วยสารประกอบที่มีความสามารถในการเปล่งแสงเคมี เครื่องหมายที่ใช้คือ luminol ซึ่งเป็นโมเลกุลที่เมื่อออกซิไดซ์โดยอนุมูลอิสระปล่อยแสงที่สามารถวัดได้โดยใช้เครื่องมือพิเศษ (Photochem®) การปรากฏตัวของสารต้านอนุมูลอิสระในส่วนผสมปันส่วนจะปิดการใช้งานของสายพันธุ์ที่รุนแรงโดยการยับยั้งการปล่อยของ chemiluminescence การวิเคราะห์ PCL นั้นรวดเร็วและละเอียดอ่อนมาก ยิ่งไปกว่านั้นด้วยการประยุกต์ใช้โปรโตคอลการวิเคราะห์ที่แตกต่างกันสองวิธีที่เรียกว่า ACW (สารต้านอนุมูลอิสระความสามารถในการละลายน้ำ) และ ACL (สารต้านอนุมูลอิสระความสามารถในการละลายไขมัน), การมีส่วนร่วมกับความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระทั้งหมด C, กรดอะมิโน, ฯลฯ ) ของ liposoluble หนึ่ง (โทโคฟีรอล, โทโคฟีรีน, แคโรทีนอยด์, ฯลฯ ) สำหรับการเปรียบเทียบค่าที่บันทึกด้วยการวัดเทียบกับโมเลกุลอ้างอิงมาตรฐานกรดแอสคอร์บิคสำหรับโปรโตคอล ACL และ Trolox สำหรับโปรโตคอล ACW จะได้รับความสามารถในการต้านอนุมูลอิสระของผลิตภัณฑ์ทดสอบ